干货:采用不同方法结合提取大量样本细胞外囊泡的对比实验报告
58 人阅读发布时间:2026-04-21 14:28
分级提取技术,为精准研究量身定制
在细胞外囊泡(EVs)研究迈向临床转化的关键阶段,如何实现高纯度、高回收率、可规模化生产的外泌体制备,已成为产业界必须攻克的核心挑战。面对不同应用场景对样品纯度、浓度和活性的差异化需求,传统的单一提取方法往往顾此失彼。
为此,上海宇玫博(Umibio)凭借其深耕的规模化生产平台,推出了差异化的解决方案。我们以293T细胞无血清细胞上清样本为案例,通过详实的NTA、TEM、BCA等关键数据对比,清晰展示了如何选择适合您需求的EVs提取技术。
一、分级策略:从高效富集到至极纯化
1:级别一:切向流
提取处理:将293T上清原液过0.22μm滤膜后,使用300K中空纤维柱浓缩10倍,浓缩液过0.22μm滤膜后即为“切向流”级提取产品;
2:级别二:切向流+层析
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将293T上清原液过0.22μm滤膜后,使用300K中空纤维柱浓缩10倍,浓缩液过0.22μm滤膜;
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使用300K中空纤维柱将馏分浓缩10倍后过0.22μm滤膜,得到高纯“切向流+层析”级别的外泌体产品。
3:级别三:切向流+超离
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将293T上清原液过0.22μm滤膜后,使用300K中空纤维柱浓缩10倍,浓缩液过0.22μm滤膜;
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过膜后的浓缩液4℃,100000g超离120min后,用适量PBS重悬,重悬液过0.22μm滤膜后得到“切向流+超离”级别的外泌体产品;
二、硬核数据对比:
所有工艺的性能,最终由数据说话。基于293T细胞上清的大规模提取实测数据,三级方案的差异一目了然:
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293T细胞上清三种级别的提取,得到的外泌体产品纯度均能达到1.0E+08个/mL以上;
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作为大规模提取的第一步,切向流步骤的蛋白去除率在90%以上,所以终产品的BCA都相对较低;
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切向流去除了大量的蛋白和小颗粒的情况下,层析进一步去除部分蛋白,提高了产品纯度;
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外泌体产品的BCA浓度与纯度不可兼得,强行浓缩会使颗粒损失增多;
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对比上清原液与其他提取方法看,超离提取的外泌体体积较少,颗粒损失较高;
三、场景化选择指南:为您的需求精准匹配
注:以上数据基于293T细胞无血清上清实测。其他细胞上清(如干细胞上清、含血清培养上清)可根据需求提供定制化提取验证。
四、结论与展望
上海宇玫博(Umibio)分级提取方案,以清晰的工艺路径、扎实的实验数据和完善的表征体系,解决了外泌体制备中“纯度、得率、浓度”不可兼得的三角难题。研究者可根据明确的应用场景导向,选择最经济、最有效的制备路径,无需再为方法学选择而困扰。
本研究数据基于293T细胞无血清上清。上海宇玫博(Umibio)亦可为干细胞、免疫细胞等其他珍贵细胞来源的上清,以及含血清培养体系,提供定制化的工艺开发与验证服务,助力各类外泌体相关研究的加速推进。
选择上海宇玫博(Umibio),选择专业。让我们携手,从精准制备开始,驾驭外泌体的未来。