细胞转染实验其实并没想象中简单，快来看看我们难姐难弟彻夜复盘总结出来的硬核干货，一起查缺补漏，提高转染效率吧！（文末有转染试剂试用，真实用户反馈优质使用体验）

决定细胞转染效率的主要因素

1. 细胞因素

细胞类型不同，转染效率也会有所差异。一般来说最容易培养和转染的是 HEK-293 细胞系，此外，贴壁细胞比悬浮细胞容易转染；增殖速度快的细胞比处于静止期的细胞容易转染；细胞系比原代细胞更易转染。

细胞密度也会影响转染效率。不同的转染试剂或者细胞类型，要求转染时的最适细胞密度各不相同。一般当细胞密度达到 60%～80% 时进行转染可以取得较高的转染效率，过低或过高都会影响转染效果。

细胞状态也非常关键，应尽量使用适度传代的细胞系，培养过程中一定要避免细菌，支原体或真菌的污染。

2. 转染载体

转染载体的大小、质量和用量也会影响转染效率，对于不同大小的载体需要优化不同的实验参数或用量，需要对质粒的浓度、纯度和构象、RNA 是否降解等进行严格的质量把控。

3. 转染试剂

转染试剂毒性太大，会抑制细胞正常生长，甚至导致大量细胞死亡。因此，应优先选用温和且毒性较低的转染试剂。不同试剂对细胞的要求不同，使用转染试剂的时候一定要看说明书。
 

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实验方法一同附上！

 

 

具体实验方法

 

 

注：每次转染前需进行预实验，以摸索最佳条件，尤其是转染试剂的最佳用量。以下以 DNA 为例，siRNA、mimics 等其他核酸操作相同。

 

1.接种细胞至 70～90% 汇合度时转染。对大多数细胞来说，转染时高细胞密度可以得到 较高的转染效率，并能减少细胞毒性；

2.使用 Opti-MEM 培养基稀释 LipoP30-B 试剂（建议设置 2 个梯度），充分混匀；

3.使用 Opti-MEM 培养基稀释 DNA，制备 DNA 预混液，然后添加 LipoP30-A 试剂， 充分混匀；

4.在每管已稀释的 LipoP30-B 试剂中加入第 3 步中稀释的 DNA 混合液（1:1 比例）；

5.室温孵育 5～15 分钟；

6.加入 DNA-脂质体复合物至细胞中；

7.37 ℃ 孵育细胞 2～4 天，然后分析转染细胞。

注：对部分敏感细胞，建议转染 6～8 小时后更换新培养基，以降低细胞毒性

 

 

操作步骤表

 

 

这款试剂真的这么好用么，我们用真实的实验数据说话！ 

与同类型产品的对比数据

 

➤ 实验目的：

通过不同品牌的转染试剂，将 1 ug 的绿色荧光质粒转染入不同的细胞中，48 小时后观察细胞中荧光表达情况。

 

➤ 实验分组：

国际 R 品牌组 （1 ug DNA 对应 1.5 uL 转染试剂）

Umibio 组（1 ug DNA 对应 1.0 uL 转染试剂）

 

➤ 实验结果

     

➤ 实验小结：

在 9 种不同的细胞系上使用了相同质量的绿色荧光蛋白表达质粒。Umibio 的 LipoP30 的转染试剂的效价不亚于国际 R 品牌的转染试剂，在个别细胞系上的转染能力更胜一筹。

 

用户试用反馈结果

 

 

  

 

 

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