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外泌体提取试剂盒(细胞上清) 400mL大体积提取
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    宇玫博

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宇玫博生物Umibio外泌体试剂盒的提取效率有多少?

1041 人阅读发布时间:2022-12-28 15:48

实验背景:
由于原始样品中通常都是混合物,除了外泌体外还有大量的杂质、碎片等,无法直接计算出外泌体试剂盒的提取效率。
实验目的:
以高纯牛奶外泌体作为原始样品,通过宇玫博生物Umibio试剂盒获得外泌体提取效率。
实验材料:
  1. 细胞上清外泌体提取试剂盒Umibio ,UR52121
  2. 牛奶外泌体提取物Umibio,UR53201
样品预处理:
取3mL高纯牛奶外泌体,使用1×PBS稀释至60mL,平均分成20mL/管,准备进行外泌体提取。
提取外泌体:
1、稀释液预处理:在牛奶外泌体的PBS稀释液中加入Exosome Concentration Solution(ECS试剂),具体的加入剂量如下:
新闻图片1
2、溶液混合:加入ECS试剂后将离心管盖紧,涡旋振荡器混匀1 min,再放置于4℃静置2 h;
3、沉淀外泌体:取出装有混合液的离心管于4℃以10000 g离心60 min,弃上清,沉淀中富含外泌体颗粒;
4、外泌体重悬:取1×PBS均匀吹打离心沉淀物和离心管壁四周(具体加入剂量如下表)待其溶解后,将重悬液转移至新的1.5 mL离心管中;
新闻图片2
5、收获外泌体颗粒:将含有重悬液的1.5 mL离心管于4℃以12000 g离心2 min,保留上清液,该上清液中富含外泌体颗粒。
纯化外泌体
1、纯化外泌体:将收获的外泌体颗粒粗品转入Exosome Purification FilterEPF柱)上室中,于4℃以3000 g离心10 min,离心后收集EPF柱管底的液体,此液体即为纯化后的外泌体颗粒;
2、外泌体的保存:纯化后的外泌体以50-100 μL体积进行分装保存于-80℃低温冰箱中,以备后继实验使用。
外泌体的质检
1,通过BCA的方法检测外泌体总蛋白量,计算出提取效率。
新闻图片3
2,通过透射电镜检测外泌体形态:
新闻图片4
实验结论:
细胞上清外泌体提取试剂盒(Umibio ,UR52121)平均提取效率为35.9%。

 

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